Культура кактусов
Шрифт:
Соли микроэлементов растворяют в 1/1000 от рабочего объема раствора питательной среды и при добавлении их в раствор берут 1 мл на 1 л среды.
Очень ответственно следует отнестись к приготовлению растворов солей железа. Само железо должно перейти в хелатную форму, поэтому навески солей растворяют по отдельности, смешивают и доводят до объема с конечной концентрацией 5 мл/л. Раствор должен получиться ярко-желтого цвета, рН 8,0. Хранить такой раствор следует в холодильнике 3 — 4 месяца. Неправильное приготовление хелатного железа может привести к выпадению в осадок фосфатов кальция и магния.
Концентрированные растворы витаминов готовят из расчета 1/1000 от конечного объема и добавляют 1 мл на 1 л раствора среды. Растворы витаминов хранят в замороженном виде.
В опытах автора очень неплохо зарекомендовала себя смесь витаминов под коммерческим названием «Ундевит». Одно драже используется для приготовления 10 л питательного раствора, поэтому драже растворяют в 100 мл воды и добавляют 10 мл на 1 л конечного раствора. В комплексе « Ундевит» содержится достаточное количество биологических антиоксидантов — витаминов С и Е, что стимулирует начальную фазу образования каллюсных клеток.
Реальную трудность в приобретении представляют фитогормональные компоненты и мезоинозит. Как уже говорилось выше, мезоинозит, как один из элементов веществ группы биоса может быть получен из дрожжевой культуры. В данном случае после ферментации требуется полностью убить грибные клетки. Это осуществляется кипячением емкости (банки) с культурой дрожжей в водяной бане под давлением. В домашних условиях этот процесс проводят в скороварке. Культура дрожжей подвергается кипячению (автоклавированию) 15 — 30 минут, фильтруется и замораживается.
При необходимости фитогормоны получают из растительного материала. Следует помнить, что некоторые биологически-активные вещества термолабильны, т.е. разрушаются при нагревании, поэтому после измельчения растительного субстрата, экстрагирования и фильтрации через
Рис. 94. Расположение агара в пробирках: 1а. «прямой агар» 16. «косой агар»
2. способ расположения пробирки с расплавленным агаром для приготовления «косого агара». Пробирки закрыты ватными тампонами.
хлопчатобумажную ткань экстракт стерилизуют путем продолжительного (0,5 —1,0 ч) облучения ультрафиолетом.
Подобным образом стерилизуют воду кокосового ореха и экстракт из незрелых плодов конского каштана. При экстрагировании биологически-активных веществ из эндосперма кокоса следует учитывать, что кокосовое масло твердое, поэтому эндосперм измельчают на терке и растирают в ступке с небольшим количеством сахара и воды. Полученную массу перекладывают на хлопчатобумажную ткань и выжимают. К жидкости добавляют равное количество этилового спирта, тщательно перемешивают и отфильтровывают. Фильтрат помещают в холодильник и после застывания на его поверхности масла аккуратно проделывают два диаметрально противоположных отверстия и сливают жидкость в отдельную стеклянную емкость. Для удаления спирта жидкость нагревают в водяной бане. Далее жидкость переливают в емкость из оргстекла или пластиковый пакет и облучают ультрафиолетом.
Так же неплохо себя зарекомендовал в качестве биологически-активной добавки настой биогумуса. Его готовят из расчета 100 г сухого биогумуса на 1 л воды при температуре +55 •— +60 °С, настаивают в течение суток, дважды фильтруют через ткань и через фильтровальную бумагу и облучают ультрафиолетом.
Перед употреблением ингредиенты смешивают, при необходимости корректируют рН до 5,5 — 6,5 , добавляя по каплям НС1 или NaOH .7 — 8 г агара растворяют в 200 мл воды, нагревают в водяной бане и добавляют в смесь при постоянном перемешивании. Объем раствора доводят до 1 л. Естественно, показатель рН несколько повысится, и его повторно корректируют.
Среду разливают в чашки Петри, банки и пробирки. Чашки Петри и банки закрывают крышками. Пробирки закрывают ватными пробками, пробки сверху обертывают целлофаном или пергаментом и затягивают резинкой. Для получения косого агара пробирки располагают наклонно до застывания агара.
В некоторый случаях, когда часть питательной среды остается невостребованной, ее переливают в отдельную емкость, нагревают на водяной бане, не доводя до кипячения, закрывают емкость крышкой или пробкой, охлаждают и хранят в холодильнике при температуре около +4 °С не более одного месяца. При необходимости емкость нагревают в водяной бане и расплавленную питательную среду разливают по сосудам.
Стерилизация исходного материала
Как уже говорилось, культуру каллюсных клеток можно получить практически из любого вегетативного и генеративного органа, но при микроразмножении кактусов используют меристематические ткани, либо первичные, либо вторичные.
В качестве материала для клонирования «меристематической тканью» используют клетки камбия (вторичной меристемы), апекса стебля или меристематические клетки ареол. В случае расположения вегетативной точки в аксилле (например, Mammillaria sp.sp), в субаксиллярном пространстве (например, Dolichothele sp.sp.) или в продольной борозде, соединяющей аксиллу и ареолу (например, Coryphantha sp.sp.), используют ткани из этих зон, т.е. для микроразмножения применяется меристема вегетативных точек.
Наиболее трудной задачей на этом этапе является получение стерильного материала — применительно к микропропагации такой материал называется эксплантат.
Для поверхностной стерилизации растительных объектов применяются хлорсодержащие вещества (гипохлорит натрия — 1 — 1,4%; гипохлорит кальция — 7 — 10%; хлорамин —2 — 10%); ртутьсодержащие вещества (сулема 0,1%; диацид); перекись водорода (2 — 10%); этиловый спирт (70 — 75%). Кактусоводу придется подбирать вид и концентрацию этих веществ опытным путем,т.к. разные экземпляры кактусов даже одного ботанического наименования и, естественно, их ткани неодинаково реагируют на воздействие различных стерилизующих веществ. Ориентироваться можно на следующие показатели:
Органы растений
Время стерилизации, мин.
гипохлорит натрия
или кальция
1 сулема
Семена
20
10
Выделенные из семян зародыши
10—15
5
Незрелые зародыши
3 — 5
1—3
Апикальная меристема
5 — 10
3 — 5
Меристема боковых вегетативных точек
10—15
3—10
Камбий от 1 — 2-х месячных сеянцев
3 — 5
1—3
Камбий из верхней части стебля
10—15
8— 10
Камбий из одревесневшей
части стелы
20
15 — 20
Раневая каллюсная меристема
2 _ 5
1